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離子交換液相色譜法中緩沖鹽的使用
更新時(shí)間:2020-09-14   點(diǎn)擊次數(shù):5981次

離子交換液相色譜法中緩沖鹽的使用

 

01

 離子交換色譜法的基本原理

 

離子交換法是針對(duì)離子型樣品,根據(jù)樣品離子與固定相表面離子交換基團(tuán)的交換能力差異進(jìn)行分離。

 

相較于經(jīng)典的離子交換樹脂,硅膠基質(zhì)離子交換固定相,機(jī)械強(qiáng)度高,耐高壓,不溶脹,傳質(zhì)快,柱效高。

 

021

離子交換法中色譜柱的選擇 

 

 

離子交換色譜法中,色譜柱的選擇需要與待測組分相匹配,通常不用離子交換柱同時(shí)分析陰離子和陽離子。

 

0301

 離子交換的影響因素

 

樣品在離子交換柱中的保留分離,除與樣品離子與固定相的作用強(qiáng)弱有關(guān),還受到流動(dòng)相的pH、離子強(qiáng)度、有機(jī)溶劑種類等因素的影響。

 

pH的影響

 

pH的變化會(huì)改變離子交換基團(tuán)上可解離的 H+ 或者OH- 的數(shù)量,因此直接影響固定相的離子交換容量。pH對(duì)離子交換能力的影響如下圖所示。

 

在反相色譜與離子交換中,有一個(gè)容易混淆的地方——pH值與pKa的關(guān)系。

 

反相色譜中,緩沖鹽主要是抑制樣品中的離子解離,保持分子狀態(tài),增強(qiáng)待測物的保留離子交換中,緩沖鹽主要是促進(jìn)樣品中的離子解離,保持離子狀態(tài),以提高待測物與固定相的離子交換作用。

 

因此,陰離子交換(酸性化合物)通常選擇pH>pKa+2.0;陽離子交換(堿性化合物)通常選擇pH<pKa-2.0.

 

離子強(qiáng)度的影響

 

1. 由于含有不同離子的緩沖鹽交換作用不同,因此相對(duì)洗脫強(qiáng)度順序也存在差異。

 

含有陰離子的鹽:(強(qiáng))檸檬酸根>PO43->HCOO->CH3COO->OH-(弱)

含有陽離子的鹽:(強(qiáng))K+>NH4+>Na+>H+>(弱)

 

2. 流動(dòng)相中鹽的濃度越高,其與樣品離子爭奪固定相上反電荷位置的能力就越強(qiáng),從而樣品的保留效果變差,可通過調(diào)節(jié)流動(dòng)相中的緩沖鹽濃度改變保留時(shí)間。

 

有機(jī)溶劑的影響

 

在離子交換中,加入少量的甲醇、乙腈等有機(jī)溶劑,可以增加樣品的溶解度,減少峰拖尾,但是也可能會(huì)降低樣品的保留。

 

因此,在離子交換方法優(yōu)化時(shí),可以根據(jù)待測物的性質(zhì),從梯度洗脫程序,緩沖鹽的種類、濃度、pH,以及有機(jī)相的種類和比例,這幾個(gè)方面來進(jìn)行調(diào)整。

 

離子交換色譜柱推薦

 

 

(一)強(qiáng)陽離子交換柱 

 

CAPCELL PAK SCX UG80

 

產(chǎn)品優(yōu)勢:

1. 氫型強(qiáng)陽離子交換柱

2. 兼具包膜技術(shù)和高純硅膠的優(yōu)點(diǎn)

3. 良好的穩(wěn)定性、壽命和性價(jià)比

 

檢測項(xiàng)目:

二甲雙胍、利巴韋林、葡jia胺、三聚氰胺、更昔洛韋、水蘇堿、羧甲司坦、普魯卡因按、苯扎氯銨、氨甲環(huán)酸、水溶性維生素、核苷酸、生物胺等。

 

 

(二) 弱陰離子交換柱

 

CAPCELL PAK NH2 UG80

 

產(chǎn)品優(yōu)勢:

1. 采用包膜技術(shù)和“橋式”鍵合方式

2. 可在LC-MS中使用

3. 正相、弱陰離子交換兩種分配模式

 

檢測項(xiàng)目:

糖類、尿囊素、奈達(dá)鉑、糖精、奎尼酸、雙氰胺/三聚氰胺、有機(jī)酸、維生素、VE、泛醇、核苷類、百草枯等。

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